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第一篇 基础理论和技术第一章 离心技术3

第一节 基本原理3

第二节 离心机的种类和基本结构5

第三节 常用离心技术6

第四节 离心技术在生物学研究中的应用9

第二章 分光光度法11

第一节 基本原理11

第二节 分光光度计12

第三节 分光光度技术的应用14

第三章 层析技术17

第一节 层析基本理论17

第二节 常用的层析技术20

第四章 电泳技术27

第一节 基本原理27

第二节 电泳的分类30

第三节 常用的电泳技术31

第五章 生物化学实验样品制备技术38

第一节 生物大分子制备的特点和一般步骤38

第二节 植物样品的制备39

第三节 动物样品的制备41

第四节 微生物样品的制备44

第五节 生物大分子——蛋白质46

第六节 生物大分子——核酸55

第六章 真核生物基因文库的构建73

第一节 cDNA文库的概念73

第二节 cDNA文库构建的策略74

第三节 cDNA文库的筛选80

第七章 核酸杂交技术83

第一节 分子杂交的一般过程83

第二节 分子杂交的种类84

第三节 探针85

第四节 印迹技术90

第五节 杂交体系92

第六节 杂交信号的检测方法92

第八章 聚合酶链式反应94

第一节 聚合酶链式反应的发展历史94

第二节 PCR的原95

第三节 PCR体系与条件96

第四节 PCR循环参数的确定98

第五节 PCR需注意的事项99

第六节 PCR的种类及用途100

第九章 基因工程105

第一节 基因工程的基本概念105

第二节 基因工程的发展历史109

第三节 基因工程的研究意义111

第四节 基因工程的基本内容113

第十章 DNA序列测定技术150

第一节 概述150

第二节 Sanger双脱氧链终止法150

第三节 Maxam-Gilbert DNA化学降解法152

第四节 测序策略154

第五节 DNA序列测定自动化157

第十一章 生物芯片技术159

第一节 生物芯片的概念159

第二节 生物芯片技术的发展历史159

第三节 生物芯片的分类及特点160

第四节 常用生物芯片的应用163

第二篇 生物化学实验第十二章 生物化学基础实验171

实验一 缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质的测定171

实验二 分光光度计线性分辨范围的测定176

实验三 还原糖和总糖含量的测定178

实验四 用阳离子交换树脂摄取氯化钠181

实验五 蛋白质的沉淀反应183

实验六 定磷法测定RNA含量185

实验七 紫外吸收法测定核酸的含量187

实验八 可溶性糖的硅胶G薄层层析189

实验九 血糖含量的测定192

实验十 血清总胆固醇的测定194

实验十一 血清甘油三酯的测定196

实验十二 维生素C含量的测定（2,6-二氯酚靛酚法）198

实验十三 氨基氮测定——甲醛滴定法201

实验十四 酵母RNA的分离及组分鉴定202

第十三章 生物化学综合实验205

实验十五 双缩脲法测定蛋白质含量205

实验十六 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量207

实验十七 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量209

实验十八 离子交换柱层析法分离氨基酸212

实验十九 从牛奶中分离制备酪蛋白213

实验二十 葡聚糖凝胶层析215

实验二十一 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点219

实验二十二 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质222

实验二十三 聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质225

实验二十四 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量230

实验二十五 蛋白质印迹（Western blot）234

实验二十六 血清谷丙转氨酶活性的测定237

实验二十七 酶的专一性239

实验二十八 激活剂和抑制剂对酶活性的影响241

实验二十九 温度对酶活性的影响243

实验三十 pH对酶活性的影响246

实验三十一 底物浓度对酶促反应速度的影响——Km值的测定249

实验三十二 绿豆超氧化物歧化酶的提取252

实验三十三 硫酸铵沉淀法纯化SOD253

实验三十四 葡聚糖凝胶层析脱盐256

实验三十五 有机溶剂分级沉淀法纯化SOD259

实验三十六 离子交换层析法纯化SOD260

实验三十七 SOD活性的测定263

实验三十八 绿豆SOD同工酶的鉴定267

实验三十九 等电聚焦电泳法测定SOD的纯度及等电点271

第三篇 分子生物学实验第十四章 分子生物学基础实验277

实验四十 质粒DNA的提取及纯化277

实验四十一 质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳281

实验四十二 DNA酶切与连接288

实验四十三 DNA片段的回收293

实验四十四 植物组织基因组DNA的提取297

实验四十五 动物组织基因组DNA的提取298

实验四十六 细菌基因组DNA的制备300

实验四十七 大肠杆菌感受态细胞的制备302

实验四十八 外源DNA的连接与转化304

实验四十九 重组转化子的酶切鉴定307

第十五章 分子生物学综合实验310

实验五十 PCR扩增外源基因310

实验五十一 Trizol法提取总RNA315

实验五十二 RT-PCR317

实验五十三 Southern杂交321

实验五十 Northern杂交326

实验五十五 外源基因的诱导表达与检测332

实验五十六 大肠杆菌包涵体的纯化与变复性335

实验五十七 RNAi抑制GFP基因的表达338

实验五十八 寡聚核苷酸介导的克隆DNA的定点诱变340

实验五十九 Real-time PCR检测基因的表达水平346

实验六十 热休克蛋白启动子的活性检测350

实验六十一 体外翻译和免疫沉淀352

实验六十二 双向电泳分离蛋白354

实验六十三 体外转录364

实验六十四 稳定转化细胞系的筛选366

实验六十五 向GenBank提交DNA序列368

实验六十六 常用生物学软件的使用370

第四篇 创新性实验一、创新实验操作流程383

二、自主创新性实验参考题目383

附录385

一、实验室中常用酸碱（液体）的比重和浓度385

二、常用缓冲液的配制385

三、硫酸铵溶液饱和度计算表390

四、常用核酸的长度与分子量391

五、常用核酸蛋白换算数据392

六、常用蛋白质分子量标准参照物393

七、常用DNA分子量标准参照物393

八、常用酶的配制393

九、常用抗生素的配制394

十、常用贮存液的配制395

十一、遗传密码400

十二、氨基酸的特性401

十三、几种最常用的限制性核酸内切酶位点402

十四、离心机转速与相对离心力的换算403

十五、常用离子交换剂404

十六、常用凝胶过滤层析介质406

十七、常用分子生物学网址408

十八、实验室规则410

十九、实验记录与实验报告410

参考文献412