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第一章 实验基本技术1

第二章 蛋白质32

实验一 蛋白质分离32

实验（一） 凝胶层析分离牛血清白蛋白与溶菌酶32

实验（二） 薄层层析分离不同种类的氨基酸34

实验（三） 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质36

实验（四） 二维蛋白质电泳39

实验（五） 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白43

实验二 蛋白质的性质（呈色反应）45

实验（一） 双缩脲法显色反应45

实验（二） 茚三酮显色反应47

实验（三） 黄色显色反应48

实验三 蛋白质的性质（沉淀反应）50

实验（一） 盐析沉淀法51

实验（二） 乙醇沉淀法52

实验（三） 重金属盐沉淀法52

实验（四） 有机酸沉淀法53

实验（五） 加热使蛋白质变性沉淀54

实验四 蛋白质的性质（两性解离和等电点）55

实验（一） 酪蛋白质的两性解离性质55

实验（二） 酪蛋白等电点的测定56

实验（三） 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点58

实验（四） 牛乳中酪蛋白的制备61

实验五 蛋白质含量测定和纯度鉴定62

实验（一） 凯氏定氮法测定蛋白质的含量62

实验（二） 双缩脲法测定蛋白质含量65

实验（三） 紫外吸收法测定蛋白质的含量67

实验（四） 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质的含量68

实验（五） Folin-酚试剂（Lowry法）测定蛋白质含量70

实验（六） BCA法测定蛋白质含量72

实验（七） SDD-聚丙烯酰胺凝胶电泳测酶相对分子量及纯度鉴定74

实验（八） 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Westem印迹）77

第三章 核酸81

实验一 核酸的分离81

实验（一） 离子交换柱层析分离核苷酸81

实验（二） 植物DNA的提取87

实验（三） λ噬菌体DNA提取89

实验（四） 鼠肝DNA的制备91

实验（五） CTAB法小量制备大肠杆菌基因组DNA95

实验（六） 组织和细胞的RNA的制备96

实验二 核酸组分鉴定99

实验（一） 肝组织中核酸的提取和核酸组分的鉴定99

实验（二） 酵母核糖核酸（RNA）的提取及组分鉴定102

实验三 核酸浓度测定104

实验（一） 定磷法测定核酸的含量104

实验（二） 紫外吸收法测定核酸的含量106

实验（三） 化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法108

实验（四） 地衣酚显色法测定RNA含量110

第四章 维生素111

实验一 维生素的提取111

实验（一） 总维生素C的提取与定量（2，4-二硝基苯肼法）111

实验（二） 胡萝卜素的柱层析分离法113

实验二 维生素的含量测定114

实验（一）2，6-二氯酚靛酚滴定法测定还原性维生素C的含量114

实验（二） 磷钼酸法测定维生素C的含量117

实验（三） 碘量法测定维生素C的含量119

第五章 酶121

实验一 酶的特点121

实验（一） 淀粉酶和蔗糖酶作用的特异性121

实验（二） 过氧化氢酶的高效性123

实验二 酶促反应动力学124

实验（一） 温度对酶活性的影响124

实验（二） pH值对酶活性的影响125

实验（三） 激活剂和抑制剂对酶活性的影响127

实验（四） 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制128

实验（五）4-氨基安替比林显色反应测定碱性磷酸酶Km129

实验（六） 磷钼酸及磷钨酸显色反应测定碱性磷酸酶Km132

实验（七） 脲酶Km值的简易测定法134

实验三 酶的制备和活力137

实验（一） 枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活力的测定137

实验（二）3-磷酸甘油醛脱氢酶偶联法测定血清醛缩酶活性140

实验（三） 酯酶的分离、纯化与活性测定143

实验（四） 琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶146

实验（五） 大蒜细胞SOD的提取与分离148

第六章 糖类151

实验一 糖及糖原的提取鉴定151

实验（一） 碱性溶液法进行肝糖原的提取与鉴定151

实验（二） 三氯乙酸法进行肝糖原的提取和鉴定153

实验二 血糖含量测定154

实验（一） 邻甲苯胺法测定血清葡萄糖154

实验（二） 蒽酮比色法测定血清中葡萄糖含量156

实验（三） GOD-PAP法测定血清葡萄糖157

实验（四） Folin-Wu法测定血清葡萄糖159

实验三 糖代谢160

实验（一）糖酵解160

实验（二） 植物中丙酮酸含量的测定162

实验四 血糖调节163

实验（一） 肾上腺素和胰岛素对家兔血糖浓度的影响163

实验（二） 运动对骨骼肌糖代谢的影响164

第七章 脂类168

实验一 脂类含量测定168

实验（一） 磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯168

实验（二） 异丙醇抽提、乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯169

实验（三） Hanus法测定不饱和脂肪酸的碘价171

实验（四） 氧化酶法测定血清总胆固醇含量173

实验（五） 邻苯二甲醛直接显色法测定血清总胆固醇的含量174

实验（六） 硫磷铁法测定血清总胆固醇含量176

实验二 脂类代谢177

实验（一） 肝的生酮作用177

实验（二） 酮体的生成及鉴定179

实验三 脂类的提取181

实验（一） 卵磷脂的提取和定性鉴定181

实验（二） 琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白182

实验（三） 薄膜层析法分离血清脂类184

第八章 氨基酸186

实验一 纸层析法测大鼠肌匀浆中谷丙转氨酶的氨基移换作用186

实验二 二硝基苯腙显色法测定血清谷丙转氨酶活性188

实验三 精氨酸酶在尿素形成中的作用190

实验四 离子交换柱层析法分离氨基酸192

第九章 分子生物学基础实验194

实验一 细菌质粒DNA提取及紫外吸收法测定核酸的含量194

实验二 质粒DNA提取（质粒小量提取试剂盒）196

实验三 质粒DNA的酶切分析198

实验四 质粒载体与外源DNA片段的连接199

实验五 CaCl2法制备E.coli感受态细胞200

实验六 重组DNA的转化和克隆筛选201

实验七 琼脂糖凝胶电泳分离DNA202

实验八 利用PCR技术从质粒扩增DNA205

实验九 RT-PCR方法207

实验十 荧光定量PCR测定培养Hela细胞中GAPDH含量208

实验十一 Southern blot实验方法211

实验十二 Northern blot实验方法213

实验十三 真核细胞DNA的制备与定量218

实验十四 表达蛋白的分离与纯化221

实验十五 表达蛋白的生物学活性检测223

实验十六 放射性同位素标记的DNA序列测定分析224

实验十七 细胞凋亡的分子生物学检测方法226

实验十八 测序技术229

实验（一） 非同位素银染测序系统操作技术230

实验（二） T7 DNA聚合酶测序技术238

实验十九 分子杂交技术245

实验（一） 双链DNA探针及其标记方法之切口平移法245

实验（二） 双链DNA探针及其标记方法之随机引物合成法246

实验（三） 单链DNA探针及其标记方法248

实验（四） 末端标记DNA探针249

实验（五） 寡核苷酸探针250

实验（六） 菌落原位杂交251

实验（七） 斑点杂交253

第十章 大实验和综合实验256

实验一 溶菌酶的提取和系列性质测定256

实验（一） 实验准备256

实验（二） 酶的提取258

实验（三） 酶的纯化260

实验（四） 酶活力、蛋白浓度测定261

实验（五） 酶促动力学（Km测定、酶的抑制）263

实验（六） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测酶相对分子量及纯度鉴定265

实验二 酸性磷酸酯酶的提取分离、活性测定267

实验（一） 酸性磷酸酯酶的提取分离纯化267

实验（二） 酶促反应进程曲线的制作269

实验（三） 酸性磷酸酯酶的酶活力测定272

实验（四） 凝胶层析法纯化酸性磷酸酯酶275

实验（五） 考马斯（Comessie）亮蓝结合法测定蛋白质浓度281

实验（六） 酸性磷酸酯酶米氏常数的测定283

实验（七） 酸性磷酸酯酶的检测——SDS-PAGE电泳法287

实验三 动物和植物组织DNA的提取和鉴定294

实验四 细胞色素C的制备和测定299

实验五 血清中IgG的分离纯化303

实验六 红细胞中SOD分离纯化及活性鉴定308

实验七 燕麦水解蛋白的制备和理化性质测定311

参考文献315

附录316

附录1 常用缓冲溶液的配制316

附录2 常用酸碱摩尔溶液的配制325

附录3 常用酸碱指示剂的配制326

附录4 常用抗凝试剂的配制327

附录5 硫酸铵饱和度计算表328

附录6 色谱法常用数据330

附录7 实验数据和数据处理338