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第一章 鱼类物种鉴定的分子生物学技术概况1

第一节 鱼类物种鉴定的分子生物学技术1

一、蛋白质检测技术1

二、DNA检测技术2

第二节 鱼类物种鉴定的遗传物质选择2

一、线粒体DNA2

二、核DNA3

三、卫星DNA4

第三节 PCR引物4

一、通用引物5

二、物种特异性引物5

第四节 网络信息资源在鱼类物种鉴定中的应用5

第二章 鱼类物种鉴定的样品处理技术8

第一节 DNA的提取和纯化8

一、DNA的提取8

二、DNA的纯化10

第二节 蛋白质的提取和纯化10

一、细胞的破碎11

二、蛋白质的提取12

三、蛋白质的分离纯化13

四、鱼肌肉蛋白的提取实例15

第三章 鱼类物种鉴定的DNA条形码技术17

第一节 DNA条形码技术的基本原理17

一、DNA条形码17

二、DNA条形码技术的靶基因18

三、DNA条形码技术的基本原理19

第二节 DNA条形码技术的基本操作流程20

一、试剂和设备20

二、基本操作流程21

第三节 DNA条形码在鱼类物种鉴定中的应用22

一、DNA条形码在鱼类研究中的应用概况23

二、DNA条形码对于鱼类分类学的意义及可行性24

三、DNA条形码在中国鱼类分类学研究中的应用实例25

四、DNA条形码技术的问题与展望26

五、16S rRNA基因和COI基因序列分析在石斑鱼物种鉴定中的应用26

第四章 鱼类物种鉴定的DNA指纹图谱技术35

第一节 基于PCR的DNA指纹图谱技术概述35

一、DNA指纹图谱技术的发展35

二、DNA指纹图谱技术的特点36

第二节 PCR-RFLP技术36

一、PCR-RFLP技术鉴定鱼种的基本原理37

二、PCR-RFLP技术的基本操作流程37

三、Lab-on-a-chip毛细管电泳（Lab-on-a-chip capillary electrophoresis，Lab-on-a-chip CE）39

四、PCR-RFLP技术在主要经济鱼类物种鉴定中的应用42

五、PCR-RFLP商业化鱼种鉴定试剂盒43

六、台湾海峡常见石斑鱼的PCR-RFLP鉴定方法45

七、渤海地区常见经济鱼类的PCR-RFLP鉴定方法48

第三节 PCR-SSCP技术49

一、PCR-SSCP技术的基本原理49

二、PCR-SSCP技术的基本操作流程50

三、PCR-SSCP技术的注意事项51

四、PCR-SSCP技术在鱼种鉴定中的应用52

第四节 PCR-RAPD技术53

一、PCR-RAPD技术的基本原理53

二、PCR-RAPD技术的基本操作流程55

三、PCR-RAPD技术的注意事项56

四、PCR RAPD技术在鱼种鉴定中的应用57

第五节 PCR-AFLP技术58

一、PCR-AFLP技术的基本原理58

二、AFLP分子标记的特点59

三、PCR-AFLP技术的基本操作流程60

四、PCR-AFLP在鱼种鉴定中的应用61

第五章 鱼种鉴定的定性PCR检测技术63

第一节 PCR检测技术概述63

一、PCR技术的基本原理63

二、PCR技术的特点64

三、鱼类物种鉴定的主要PCR技术类型64

四、PCR技术鉴定鱼种的注意事项65

五、PCR技术在鱼种鉴定中的应用71

第二节 鱼类物种鉴定的普通PCR检测流程73

一、基本操作流程73

二、试剂和设备74

三、DNA的提取74

四、PCR反应74

五、结果分析75

第三节 鱼种鉴定的实时荧光PCR检测流程76

一、基本操作流程76

二、试剂和设备76

三、DNA的提取77

四、实时荧光PCR反应77

五、结果分析78

六、台湾海峡10种石斑鱼的荧光PCR检测方法79

第四节 鱼类物种鉴定的DNA检测方法比较83

第六章 鱼种鉴定的蛋白质检测技术85

第一节 样品种类与蛋白质检测方法的选择85

一、生加工鱼产品85

二、混合粗加工鱼产品86

三、加工鱼制品87

四、罐装灭菌鱼制品87

第二节 同工酶电泳技术88

一、同工酶电泳技术的研究历史及现状88

二、同工酶电泳技术在鱼种鉴定中的应用88

三、同工酶电泳的实验方法89

第三节 蛋白质组学技术90

一、蛋白质组学技术概述90

二、蛋白质组学的基本实验技术91

第四节 蛋白质毛细管电泳技术94

一、毛细管电泳的基本原理94

二、毛细管电泳类型94

三、毛细管电泳的基本操作流程96

四、毛细管电泳技术的优缺点97

第五节 酶联免疫技术97

一、ELISA方法的基本原理98

二、ELISA中用于标记的酶98

三、抗体的酶标记方法及标记效果测定99

四、ELISA方法的基本步骤及类型100

五、ELISA方法在鱼种鉴定中的应用101

第七章 鱼种鉴定的生物芯片技术102

一、基因芯片技术102

二、蛋白质芯片技术105

三、液相芯片技术109

四、生物芯片技术发展趋势与展望112

第八章 水产品标签的管理和措施113

第一节 美国关于水产品标签的法规和措施113

一、FDA法规要求113

二、FDA鱼种鉴定的DNA条形码标准操作程序简介113

第二节 欧盟关于水产品标签的法规和措施116

一、欧盟法规要求116

二、欧盟鱼种鉴定的技术方法和关键因素117

三、欧盟鱼种鉴定方法的适用性118

四、欧盟经确认的鱼种鉴定方法118

五、鱼种鉴定的参考物质和试剂盒118

附Ⅰ 鱼类分类系统119

附Ⅱ FDA海产品名录（2011）121

参考文献170