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第一章 概述1

第一节 什么是流式细胞术？1

第二节 流式细胞术能做什么？1

第三节 背景与回顾2

第四节 仪器简介4

一、BD公司4

二、Beckman Coulter公司8

三、Cytomation公司12

第二章 流式细胞术原理15

第一节 工作原理15

第二节 液流系统16

一、鞘液16

二、喷嘴17

三、流式照射室18

第三节 光学检测系统18

一、激光和荧光18

二、激光照射液流22

三、光学信号的检测23

四、参与信号处理的光学元件26

五、光学信号检测系统27

第四节 电子控制系统30

一、光电检测器30

二、通道32

三、阈值32

小结32

参考文献33

第三章 数据储存与分析系统34

第一节 数据储存34

第二节 数据分析34

一、常用术语35

二、流式图谱的表现形式38

三、荧光补偿46

第三节 数据分析实例54

实例一：双参数FSC／SSC分析54

实例二：三参数FSC／SSC／FL1分析54

实例三：四参数FSC／SSC／FL1／FL2简单样本分析55

实例四：四参数FSC／SSC／FL1／FL2复杂样本分析56

小结58

参考文献58

第四章 细胞分选59

第一节 细胞分选的原理59

一、液滴形成59

二、延迟时间60

三、液滴充电与偏转62

四、液滴的收集62

第二节 影响分选的因素62

一、分选速度62

二、分选门的设定65

三、分选模式67

第三节 分选的质量控制与评价68

一、分选的准确性68

二、分选的效率69

三、无菌分选70

四、分选对细胞活性的影响70

第四节 分选前的准备71

一、分选用细胞的制备要求71

二、准备的材料72

三、分选时需考虑的几个问题72

第五节 细胞分选的应用实例73

实例一：淋巴细胞分选73

实例二：组织特异性干细胞分选73

实例三：染料排异性干细胞分选76

实例四：精子分选79

小结80

参考文献81

第五章 细胞表面标志的检测83

第一节 血液细胞的流式检测83

第二节 细胞表面标志的染色技术85

一、细胞的表面分化抗原85

二、直接染色法和间接染色法86

第三节 对照的设置87

一、阴性对照87

二、同型对照89

三、阳性对照90

四、荧光补偿91

第四节 定量测定92

一、外标法92

二、内标法93

三、标准曲线法93

四、分辨率94

第五节 设门的策略95

一、设门96

二、检验门97

三、荧光设门100

四、多色流式分析实例101

小结103

参考文献103

第六章 细胞内蛋白的检测104

第一节 流式细胞术检测细胞内蛋白的特点104

第二节 细胞内蛋白染色通则106

一、细胞内蛋白染色的步骤106

二、细胞内蛋白染色应遵循的原则107

第三节 磷酸化蛋白的流式检测107

一、固定和通透细胞108

二、荧光抗体染色109

三、优化染色方法111

四、多种磷酸化蛋白同时检测111

第四节 细胞因子的流式检测113

一、T淋巴细胞的细胞因子检测113

二、单核细胞的细胞因子检测114

三、细胞内蛋白流式检测的优缺点115

第五节 微球免疫测定法115

一、CBA方法的原理116

二、CBA方法的流程116

三、CBA方法的检测范围119

四、CBA方法的优缺点120

第六节 磷酸化蛋白与DNA同时检测120

小结121

参考文献121

第七章 细胞核成分的检测123

第一节 常用的DNA染料123

第二节 细胞周期与DNA的动态分析125

一、细胞周期的定量分析方法126

二、粘连细胞的分析128

三、BrdU／PI双参数分析细胞周期129

四、BrdU／PI双参数分析细胞周期的动态变化130

五、Hoechst／PI双参数分析细胞周期的动态变化131

第三节DNA总量分析和倍体分析131

一、DNA总量分析131

二、正常生物体的倍体分析132

三、肿瘤细胞的非整倍体分析133

四、植物倍体的分析134

第四节 细胞同步化135

一、自然同步化135

二、人工同步化135

第五节DNA与RNA同时检测137

一、吖啶橙（AO）同时检测DNA与RNA137

二、Hoechst 33342／PY同时检测DNA和RNA137

第六节DNA与蛋白质同时检测138

一、DNA和总蛋白同时检测138

二、DNA和细胞周期蛋白同时检测139

第七节 染色体分析140

第八节 流式细胞术在死亡生物学中的应用142

一、散射光的检测143

二、caspases检测143

三、线粒体膜电位的检测144

四、质膜的检测147

五、DNA测定法148

六、流式微球免疫测定法150

七、细胞衰老与端粒测定150

八、坏死细胞检测152

小结153

参考文献153

第八章 流式细胞术的应用概述156

第一节 流式细胞术在生物学研究中的应用156

一、在细胞生物学中的应用156

二、在细胞周期研究和DNA倍体分析中的应用157

三、在细胞凋亡分析中的应用157

四、在染色体核型分析中的应用157

五、在分子遗传学中的应用157

六、在免疫学中的应用157

七、在植物学中的应用158

第二节 流式细胞术在医学研究及临床中的应用158

一、在肿瘤学中的应用158

二、在临床细胞免疫学中的应用159

三、在血液病治疗中的应用162

四、在血栓与出血性疾病治疗中的应用163

五、生物学领域的其他应用164

第三节 流式细胞术在农林畜牧养殖业中的应用164

一、在植物学中的应用164

二、在家畜性别控制中的应用165

三、在家畜疾病监控与预防中的应用165

第四节 流式细胞术在微生物学中的应用165

一、在病原微生物研究中的应用166

二、在环境微生物研究中的应用167

第五节 流式细胞术在食品、药品检测方面的应用168

一、在食品检测中的应用168

二、在药品检测中的应用169

第六节 流式细胞术新技术的应用171

一、CBA方法171

二、定量流式细胞术172

小结172

参考文献173

第九章 流式细胞术的样本制备和染色方法175

第一节 单细胞悬液的制备175

一、小鼠末梢血的采集和单细胞悬液的制备175

二、小鼠胸腺的分离和单细胞悬液的制备176

三、小鼠骨髓的采集和单细胞悬液的制备176

四、密度梯度离心法制备外周血单个核细胞悬液177

五、小鼠脾脏的分离和单细胞悬液的制备178

六、小鼠成体乳腺单细胞悬液的制备179

七、小鼠胰腺单细胞悬液的制备179

第二节 荧光素标记抗体的制备180

一、FITC／ Texas Red标记180

二、生物素标记181

三、Allophycocyanin（APC）或者Phycoerythrin（PE）标记182

第三节 流式分析和分选用的细胞染色方法183

一、流式分析用的细胞染色方法183

二、流式分选用的细胞染色方法184

三、SP细胞的染色方法185

四、流式分选用的精子染色方法186

第四节 流式细胞术检测细胞内分子186

一、常用的细胞固定方法187

二、细胞内分子的染色方法187

三、细胞内和细胞外分子同时染色的方法188

第五节 流式细胞术检测细胞周期188

一、固定全细胞的PI染色方法189

二、非固定细胞的无洗染色方法190

三、BrdU染色方法191

四、植物细胞的DNA染色方法191

第六节 细胞同步化实验方法192

一、过剩胸腺嘧啶脱氧核苷法——S期细胞同步化192

二、羟基脲法——S期细胞同步化193

三、秋水仙胺法——M期细胞同步化193

四、血清饥饿法——G0期细胞同步化194

五、G1期和G2期细胞同步化实验方法194

第七节 流式细胞术同时检测DNA和RNA194

一、Hoechst 33342／PY同时检测DNA和RNA194

二、吖啶橙（AO）同时检测DNA和RNA195

第八节 细胞凋亡的检测196

一、PI染色法——DNA凋亡峰的检测196

二、Annexin V／PI双标记法197

三、Hoechst 33342／PI双染色法198

四、TUNEL测定法198

小结199

参考文献200

附录201

一、流式细胞术相关网址201

二、流式细胞术相关实验方法网址202

三、荧光素试剂公司202

四、荧光素光谱网址203

五、荧光素激发和发射光谱一览表204