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第1章 抗体概述1

1.1 抗体的发展历程1

1.1.1 抗体的发现1

1.1.2 抗体技术的发展2

1.2 抗体的分子结构4

1.2.1 抗体的概念4

1.2.2 抗体分子的组成5

1.2.3 抗体分子超家族6

1.3 抗体的类型8

1.3.1 IgG8

1.3.2 IgM9

1.3.3 IgA9

1.3.4 IgE10

1.3.5 IgD10

1.4 抗体的功能10

1.4.1 抗体分子的水解片段11

1.4.2 抗体分子的功能区结构12

1.4.3 抗体抗原结合13

1.4.4 补体激活14

1.4.5 Fc受体介导的效应功能15

1.5 抗体技术的应用15

1.5.1 免疫检测试剂盒16

1.5.2 免疫胶体金16

1.5.3 免疫成像技术17

1.5.4 医学诊断17

1.5.5 肿瘤治疗17

1.6 抗体技术的发展趋势18

1.6.1 抗体药物的人源化18

1.6.2 抗体药物的微型化19

1.6.3 免疫检测的可视化20

1.6.4 免疫检测的自动化21

第2章 抗原制备22

2.1 完全抗原的制备23

2.1.1 颗粒性抗原的制备23

2.1.2 可溶性抗原的制备24

2.2 小分子抗原的制备26

2.2.1 载体选择26

2.2.2 有羧基和氨基的半抗原的偶联27

2.2.3 无羧基和氨基的半抗原的偶联29

2.3 超抗原30

2.3.1 超抗原的种类31

2.3.2 超抗原的生物学意义31

2.4 抗原的鉴定32

2.4.1 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳32

2.4.2 双向免疫扩散试验32

2.4.3 免疫电泳33

2.5 小分子半抗原偶联物的鉴定33

2.5.1 琼脂糖凝胶电泳法34

2.5.2 紫外扫描鉴定34

2.5.3 红外扫描鉴定35

2.5.4 酶联免疫吸附法36

第3章 动物免疫与多克隆抗体制备38

3.1 动物免疫38

3.1.1 免疫动物的选择38

3.1.2 佐剂的选择40

3.1.3 免疫剂量和途径41

3.1.4 可溶性抗原的免疫方案42

3.1.5 颗粒性抗原的免疫方案43

3.2 血清采集43

3.2.1 少量取血43

3.2.2 中等量取血44

3.2.3 大量采血44

3.3 免疫效价检测45

3.4 多抗血清的纯化与保存46

3.4.1 多抗血清的纯化47

3.4.2 抗体的保存47

3.5 多抗的性质鉴定47

3.5.1 多抗血清的特异性47

3.5.2 血清效价测定48

3.5.3 基于多抗的毒素检测49

3.5.4 利用多抗血清检测实际样品49

第4章 单克隆抗体的筛选与鉴定51

4.1 单克隆抗体产生的原理51

4.2 细胞融合52

4.2.1 饲养细胞53

4.2.2 骨髓瘤细胞53

4.2.3 融合剂55

4.2.4 细胞融合55

4.3 杂交瘤细胞的筛选56

4.3.1 HAT培养基筛选56

4.3.2 iELISA筛选58

4.4 杂交瘤细胞的克隆化与鉴定59

4.4.1 杂交瘤细胞的克隆化60

4.4.2 抗体亚类分析60

4.4.3 细胞染色体分析61

4.4.4 细胞培养上清效价检测62

4.4.5 抗体特异性63

4.5 杂交瘤细胞的保存与复苏65

4.5.1 杂交瘤细胞的保存65

4.5.2 杂交瘤细胞的复苏66

第5章 抗体的大量制备与性质研究67

5.1 单克隆抗体大量制备的方法67

5.1.1 动物体内诱生法67

5.1.2 体外培养法69

5.1.3 杂交瘤细胞的无血清培养70

5.2 单克隆抗体的纯化71

5.2.1 亲和层析法72

5.2.2 沉淀法74

5.3 抗体的性质研究77

5.3.1 抗体特异性测定77

5.3.2 抗体亲和力测定81

5.3.3 抗体稳定性测定83

5.4 抗体的检测84

5.4.1 检测标准竞争曲线的绘制84

5.4.2 加标准样品检测85

第6章 基因工程抗体的制备86

6.1 基因工程抗体的种类86

6.1.1 人源化抗体87

6.1.2 小分子抗体91

6.1.3 特殊基因工程抗体95

6.2 抗体基因库的构建96

6.2.1 噬菌体抗体库的构建97

6.2.2 半合成抗体库的构建99

6.2.3 全合成抗体库的构建100

6.2.4 天然抗体库的构建100

6.3 抗体的筛选与鉴定101

6.3.1 抗体库的筛选方法101

6.3.2 抗体特性的鉴定105

6.3.3 筛选效率的检测108

第7章 抗体的改造110

7.1 抗体亲和力成熟110

7.1.1 抗体亲和力成熟过程111

7.1.2 体内抗体亲和力成熟的策略111

7.1.3 体外抗体亲和力成熟的策略112

7.1.4 体外亲和力成熟实例119

7.2 抗体稳定性改造121

7.2.1 单链抗体121

7.2.2 二硫键稳定的Fv（dsFv）122

7.2.3 双价dsFv123

7.2.4 变型Fv123

7.3 抗体人源化改造124

7.3.1 嵌合抗体125

7.3.2 CDR移植抗体125

7.3.3 SDR移植抗体126

7.3.4 噬菌体抗体库构建人源化抗体127

7.3.5 完全人源化抗体127

第8章 抗体表达与纯化129

8.1 抗体的融合表达129

8.1.1 融合表达载体130

8.1.2 融合表达标签131

8.1.3 融合表达的宿主134

8.2 抗体的分子伴侣表达138

8.2.1 分子伴侣的分类138

8.2.2 分子伴侣表达实例139

8.3 表达抗体的纯化145

8.3.1 沉淀法145

8.3.2 层析技术146

第9章 免疫检测技术150

9.1 酶联免疫吸附测定150

9.1.1 ELISA的基本原理150

9.1.2 ELISA的种类151

9.1.3 ELISA检测方法的建立155

9.2 免疫印迹技术158

9.2.1 免疫印迹的基本步骤158

9.2.2 免疫印迹结果的分析160

9.3 胶体金检测技术160

9.3.1 胶体金制备161

9.3.2 抗体的胶体金标记163

9.3.3 金标试纸条的组装167

9.3.4 胶体金检测168

9.4 免疫检测的其他技术172

9.4.1 免疫沉淀法172

9.4.2 免疫组织化学173

9.4.3 免疫荧光技术173

9.4.4 补体结合反应技术173

9.4.5 多元免疫分析技术174

主要参考文献177