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第一章 绪论1

1.1 植物应答非生物逆境的蛋白质组学研究1

1.1.1 植物蛋白质组学研究的意义1

1.1.2 植物应答非生物逆境的蛋白质组学研究进展3

1.1.3 植物蛋白质组学领域存在的问题和对未来的展望19

1.2 植物耐受非生物逆境研究模式植物——盐芥21

1.2.1 盐芥的基本生物学特征21

1.2.2 盐芥是植物耐受非生物逆境研究的理想模型22

1.2.3 盐芥耐受非生物逆境机理研究进展23

1.3 科学问题的提出和整体试验设计25

第二章 盐芥应答高盐胁迫的蛋白质组学分析27

2.1 材料与方法29

2.1.1 植物材料与胁迫处理29

2.1.2 生理指标的测定30

2.1.3 蛋白提取和蛋白定量30

2.1.4 双向电泳、染色、扫描和软件分析31

2.1.5 胶内酶解和质谱分析33

2.1.6 统计处理34

2.2 结果与讨论35

2.2.1 盐芥对于高盐胁迫的生理反应35

2.2.2 盐芥叶片总蛋白响应短期高盐胁迫的蛋白质组学分析37

2.2.3 盐芥根总蛋白响应短期高盐胁迫的蛋白质组学分析53

2.2.4 盐芥叶片总蛋白响应长期高盐胁迫的蛋白质组学分析74

第三章 盐芥响应高盐胁迫的磷酸化蛋白质组学分析84

3.1 材料与方法85

3.1.1 植物材料与胁迫处理85

3.1.2 蛋白提取和蛋白定量85

3.1.3 双向电泳、染色、扫描和软件分析86

3.1.4 胶内酶解和质谱分析86

3.2 结果86

3.2.1 盐芥根总蛋白的双向电泳和磷酸化染色分析86

3.2.2 差异磷酸化蛋白点的质谱鉴定88

3.3 讨论95

第四章 盐芥根响应高盐胁迫的基因差异表达分析101

4.1 材料和方法102

4.1.1 植物材料与胁迫处理102

4.1.2 cDNA合成和纯化103

4.1.3 抑制消减杂交106

4.1.4 制备消减杂交文库106

4.1.5 EST测序和序列分析106

4.2 结果107

4.2.1 短期高盐胁迫的EST文库的构建和序列分析107

4.2.2 EST序列的功能分类分析107

4.3 讨论113

4.3.1 与盐芥其他EST的比较113

4.3.2 盐芥根对高盐胁迫的感受、信号转导和基因调控114

4.3.3 根功能的维持参与盐芥根对高盐胁迫的耐受118

4.3.4 生长素介导的信号通路参与盐芥根对高盐胁迫的耐受120

第五章 盐芥高盐响应基因enolase的克隆及初步分析122

5.1 材料与方法123

5.1.1 RNA提取和cDNA的合成123

5.1.2 3’RACE获得基因全长123

5.1.3 原核表达124

5.1.4 生物信息学分析125

5.2 结果和分析126

5.2.1 全长序列的克隆126

5.2.2 生物信息学分析127

5.2.3 融合蛋白的表达和纯化129

第六章 盐芥响应低温、干旱胁迫的蛋白质组学分析132

6.1 材料与方法134

6.1.1 植物材料与胁迫处理134

6.1.2 生长和生理指标的测定135

6.1.3 蛋白提取、定量和双向电泳135

6.1.4 Western blot分析135

6.1.5 实时定量PCR分析136

6.1.6 统计处理137

6.2 结果与讨论138

6.2.1 盐芥对于低温和干旱胁迫的生理反应138

6.2.2 盐芥叶片可溶性总蛋白的应答低温胁迫的双向电泳分析140

6.2.3 盐芥叶片低温胁迫差异表达蛋白的质谱鉴定143

6.2.4 盐芥叶片应答低温胁迫的代谢调整分析152

6.2.5 盐芥低温响应蛋白mRNA水平和蛋白表达水平的对比分析164

6.2.6 盐芥叶片总蛋白响应干旱胁迫的双向电泳分析和质谱鉴定166

6.2.7 干旱胁迫对盐芥叶片蛋白质组的影响168

6.2.8 盐芥叶片应答干旱胁迫的代谢调整分析171

附录174