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第一章 概述1

第一节microRNA的发现历程1

第二节microRNA的起源与加工成熟2

第三节microRNA的特征和鉴别9

第四节microRNA的调控机理11

第五节microRNA的功能14

第六节microRNA、siRNA、piRNA及其他非编码RNA19

参考文献25

第二章microRNA的生物信息学研究方法31

第一节microRNA的生物信息学分析策略概述31

第二节microRNA序列信息的获取及相关数据库的建立32

第三节microRNA簇的分析策略41

第四节microRNA的种系发育分析47

第五节microRNA基因的转录调控分析49

参考文献69

第三章microRNA的分子生物学研究方法71

第一节microRNA表达分析方法71

第二节microRNA体外或体内水平的过表达研究75

第三节microRNA表达抑制研究76

第四节 体外验证microRNA作用的靶基因77

第五节microRNA功能研究的策略78

参考文献79

第四章microRNA新基因的预测、克隆鉴定及注册84

第一节microRNA新基因的预测及注册程序84

第二节microRNA新基因的克隆及鉴定方法87

参考文献100

第五章microRNA表达分析方法103

第一节microRNA基因芯片分析103

第二节microRNA PAGE/Northern Blot分析113

第三节microRNA的实时定量PCR检测120

第四节microRNA LNA-ISH原位杂交130

参考文献134

第六章microRNA表达的干预方法——过表达139

第一节 化学合成的microRNA mimics139

第二节 真核系统过表达——非病毒载体瞬时表达载体的构建140

第三节microRNA腺病毒过表达系统142

第四节microRNA的慢病毒过表达系统148

参考文献155

第七章microRNA表达的干预方法——表达抑制157

第一节 反义核酸分子的抑制策略——化学合成的microRNA抑制剂157

第二节 基因水平的抑制策略161

第三节 基于病毒表达系统的microRNA抑制策略162

参考文献167

第八章 靶基因预测分析及萤光素酶双报告基因系统验证170

第一节 生物信息学预测——microRNA靶基因分析软件的设计及使用170

第二节 萤光素酶双报告基因系统的应用184

参考文献194

第九章microRNA研究方法在肝细胞癌研究中的应用197

第一节microRNA-21在肝细胞癌中的功能研究简介197

第二节microRNA-21在肝细胞癌中的功能研究所用实验材料与方法198

第三节miR-21在肝细胞癌发生过程中的表达分析及功能研究211

第四节miR-21在肝细胞癌发生及发展过程中的作用机制研究216

第五节miR-21通过调控不同的靶基因在肝细胞癌发生过程中所发挥的功能研究223

第六节miR-21对重要信号通路及功能基因的影响229

第七节microRNA在肿瘤研究中的分析与展望231

参考文献234