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第一篇 基本操作及常用仪器简介1

第一章 生物化学与分子生物学常用技术1

第一节 离心技术1

一、离心技术的基本原理1

二、离心机的类型和主要构造2

三、离心方法6

第二节 核酸的分离与纯化9

一、核酸分离的原则9

二、核酸分离的主要步骤10

三、核酸的浓度、纯度测定和完整性鉴定13

四、核酸的保存15

第三节 蛋白质和酶的纯化16

一、蛋白质分离的原则16

二、蛋白质分离的主要步骤16

三、蛋白质的纯化17

四、蛋白质浓度的测定21

五、蛋白质的保存22

第四节 分光光度技术24

一、分光光度技术的基本原理24

二、分光光度计的种类、结构和工作原理26

第五节 电泳技术28

一、电泳技术的发展史28

二、电泳技术的基本原理28

三、影响电泳分离的主要因素31

四、电泳的分类33

五、常用电泳技术35

第六节 层析（色谱）技术51

一、层析（色谱）技术发展简史51

二、层析方法的一般原理52

三、层析的分类52

四、常见的层析技术53

第七节 聚合酶链式反应65

一、PCR的基本原理65

二、PCR的反应条件69

三、常见PCR技术的种类72

四、PCR技术的应用及其注意事项75

第八节 印迹技术77

一、DNA印迹77

二、RNA印迹78

三、蛋白质的印迹分析78

第二章 基本实验操作80

第一节 洗涤和干燥80

一、玻璃仪器的洗涤清洁80

二、玻璃仪器的干燥81

三、沉淀的过滤和洗涤82

第二节 常用的实验操作技术83

一、吸量管的种类和使用83

二、混匀85

三、保温85

四、过滤85

五、离心沉淀法85

六、实验样品的制备86

第三章 常用仪器88

第一节 分光光度计88

一、仪器组成88

二、使用和维护89

三、注意事项90

第二节 离心机91

一、仪器组成91

二、种类91

三、使用和维护91

第三节 电泳仪93

一、使用方法93

二、注意事项93

第四节 PCR仪93

一、使用方法93

二、注意事项94

第五节 真空冷冻干燥机94

一、使用方法94

二、注意事项95

第六节 高压蒸汽灭菌锅95

一、使用方法95

二、注意事项95

第七节 恒温培养箱96

一、使用方法96

二、注意事项96

第八节 生物安全柜96

一、使用方法96

二、注意事项97

第四章 实验室规则及安全防护98

一、实验室规则98

二、实验室的安全与防护98

第五章 实验报告的撰写101

一、实验报告书写的具体要求101

二、书写实验报告的基本内容101

第二篇 经典生物化学实验102

第六章 蛋白质定量分析实验102

实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量102

实验二 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量105

实验三 紫外分光光度法测定蛋白质浓度109

实验四 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度112

第七章 层析实验115

实验五 纸层析法观察转氨基作用115

实验六 葡聚糖凝胶柱层析分离血红蛋白与鱼精蛋白118

实验七 离子交换层析分离混合氨基酸121

第八章 电泳实验123

实验八 血浆脂蛋白醋酸纤维素薄膜电泳123

实验九 SDS-PAGE测定蛋白质的分子量126

第九章 酶学实验130

实验十 血清谷丙转氨酶活性测定（赖氏法测定血清谷丙转氨酶）130

实验十一 过氧化氢酶米氏常数的测定133

第十章 分子生物学基础实验136

实验十二 肝组织中核酸的提取和定量分析（细胞核的分离、纯化及DNA、RNA含量测定）136

实验十三 DNA的提取及紫外吸收法测定含量——蛋白酶K-酚抽提法142

实验十四 总RNA的提取制备与检测——异硫氰酸胍-酚-三氯甲烷一步法146

实验十五 Northern印迹杂交149

第三篇 综合性实验154

实验十六 碱性磷酸酶的分离提取、比活性及Km值测定154

实验十七 BCA法测定蛋白质浓度160

实验十八 质粒DNA的提取162

实验十九 DNA的限制性酶切与琼脂糖凝胶电泳164

实验二十 质粒PUC18/GAPDH基因的PCR扩增167

实验二十一 DNA连接实验171

实验二十二 重组DNA转化与蓝白斑筛选173

第四篇 自主设计性实验179

附 实验报告范例179

实验二十三 酪蛋白等电点的测定180

实验二十四 胰蛋白酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素182

实验二十五 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用184

实验二十六 氨中毒实验185

实验二十七 肾上腺素、胰岛素对血糖的调节作用186

附录一 常用缓冲溶液的配制188

附录二 常用酸碱摩尔溶液的配制194

附录三 常用酸碱指示剂的配制195