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第一章定量分析技术1

第一节 滴定分析法1

一、基本原理1

二、标准溶液3

三、滴定分析的计算4

四、减小滴定误差的方法6

第二节紫外可见分光光度法7

一、基本原理7

二、分光光度计的主要部件8

三、分光光度法的定性和定量9

四、减小测定误差的方法10

第三节 荧光分析法11

一、基本原理11

二、荧光仪的主要部件12

三、荧光分析法的定性和定量12

四、减小测量误差的方法14

第四节 酶活力及动力学数据的测定14

一、酶活力的测定15

二、Km和Vmax的测定17

三、其他动力学数据的测定17

实验1-1粗脂肪的提取和定量测定18

实验1-2碘价的测定（Hanus法）19

实验1-3皂化价的测定20

实验1-4酸价的测定21

实验1-5蛋白质的测定（凯氏定氮法）21

实验1-6 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量23

实验1-7碘量法测定维生素C的含量24

实验1-8血糖定量测定（GOD-PAP法）25

实验1-9蒽酮比色定糖法26

实验1-10 3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量26

实验1-11血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）27

实验1-12血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）28

实验1-13双缩脲法测定蛋白质含量29

实验1-14 Folin试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量29

实验1-15考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量30

实验1-16紫外吸收法测定蛋白质含量31

实验1-17紫外吸收法测定核酸含量32

实验1-18二苯胺显色法测定DNA含量33

实验1-19地衣酚显色法测定RNA含量34

实验1-20荧光法测定维生素B2含量34

实验1-21血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）的测定35

实验1-22酸性磷酸酯酶的测定37

第二章提取、沉淀和离心分离技术38

第一节提取技术38

一、材料的选择与处理38

二、细胞的破碎39

三、抽提40

第二节 沉淀分离技术42

一、蛋白质的沉淀分离42

二、核酸的提取与沉淀分离45

三、多糖的提取和分离46

四、小分子活性成分的提取和分离48

第三节 膜分离技术56

一、膜分离技术的分类56

二、膜的分类57

三、膜的使用寿命57

四、透析58

五、微滤、超滤和反渗透59

第四节 提取物的浓缩、结晶和干燥60

一、浓缩60

二、结晶62

三、干燥63

第五节 离心分离技术64

一、离心机的种类与用途64

二、离心分离方法的选择65

三、离心条件的确定66

四、离心操作的注意事项68

实验2-1香菇多糖的制备68

实验2-2卵磷脂的制备69

实验2-3大蒜SOD的提取与分离71

实验2-4菜花（花椰菜）中核酸的分离和鉴定72

实验2-5酵母RNA的提取与分离73

实验2-6从肝脏中提取DNA74

第三章层析技术76

第一节 吸附层析76

一、吸附柱层析77

二、大孔吸附树脂和聚酰胺柱层析80

三、聚酰胺薄膜层析81

第二节 分配层析82

一、概述82

二、纸层析83

第三节 凝胶层析86

一、基本原理86

二、凝胶的选择87

三、操作88

第四节 离子交换层析89

一、基本原理89

二、离子交换剂90

三、操作93

第五节 亲和层析95

一、配基与偶联凝胶的选择与处理95

二、亲和层析的操作条件96

第六节 薄层层析96

一、支持剂的选择与处理97

二、薄层板的制作97

三、层析方法98

第七节 气相色谱99

一、基本原理99

二、气相色谱的气路系统100

三、色谱柱100

四、检测器102

五、定性和定量方法102

第八节 高效液相色谱103

一、概述103

二、HPLC的特点103

三、HPLC的分类104

四、HPLC的仪器构成105

五、定性定量方法106

实验3-1氨基酸的纸层析107

实验3-2微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸108

实验3-3核苷酸的离子交换层析109

实验3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析110

实验3-5凝胶层析测定蛋白质的Mr111

实验3-6胰蛋白酶的亲和层析112

实验3-7 HPLC法测定生物类黄酮含量113

实验3-8 HPLC法测定维生素A含量114

第四章 电泳技术115

第一节 基本原理115

一、泳动度115

二、影响泳动度的因素116

第二节 乙酸纤维素薄膜电泳117

第三节 琼脂糖凝胶电泳118

一、琼脂糖凝胶的特点118

二、DNA的琼脂糖凝胶电泳119

三、印迹转移电泳120

四、交变脉冲电场凝胶电泳120

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳121

一、聚丙烯酰胺凝胶的特点121

二、凝胶聚合的原理及有关特性122

三、PAGE原理124

四、SDS-PAGE原理125

五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理126

六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理129

第五节 高效毛细管电泳130

一、基本原理130

二、实验方法131

三、分离类型及应用132

第六节 免疫分析技术133

一、抗体的性质和制备133

二、抗原抗体反应137

实验4-1血清蛋白的乙酸纤维素薄膜电泳141

实验4-2垂直板PAGE分离血清蛋白143

实验4-3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量144

实验4-4等电聚焦电泳测定血清蛋白质等电点145

实验4-5 DNA的琼脂糖凝胶电泳147

实验4-6 PAGE分离RNA148

实验4-7对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白149

实验4-8火箭免疫电泳法测定抗原含量150

第五章 分子生物学基本技术151

第一节DNA的体外合成151

一、DNA的化学合成151

二、聚合酶链反应技术152

第二节 核酸的分子杂交156

一、探针的种类与选择156

二、标记物的选择157

三、探针的放射性同位素标记158

四、探针的非放射性标记158

五、膜上印迹杂交的条件选择159

六、杂交信号的检测161

七、DNA芯片技术及应用162

第三节 基因克隆163

一、目的基因的来源163

二、常用的克隆载体164

三、DNA分子的体外连接166

四、重组子导入受体细胞167

五、重组子的筛选167

六、基因组文库的构建169

七、cDNA文库的构建170

第四节 基因表达172

一、原核生物的表达载体173

二、用于原核细胞表达的外源基因174

三、提高表达水平的措施174

四、外源基因在酵母细胞中的表达177

五、外源基因在昆虫杆状病毒中的表达178

六、外源基因在哺乳动物细胞中的表达179

第五节 转基因植物和转基因动物182

一、转基因植物182

二、转基因动物183

第六节 核酸的序列测定185

一、链终止法186

二、新一代高通量测序技术186

实验5-1植物基因组DNA的提取188

实验5-2动物基因组DNA的提取190

实验5-3细菌基因组DNA的提取191

实验5-4质粒DNA的提取192

实验5-5聚合酶链式反应（PCR）194

实验5-6质粒DNA的酶切及电泳鉴定195

实验5-7 DNA重组196

实验5-8大肠杆菌的转化196

实验5-9外源基因在大肠杆菌中的诱导表达197

第六章 综合性实验和设计性实验198

实验6-1超氧化物歧化酶的分离纯化和同工酶分析199

实验6-2蛋白质印迹分析203

实验6-3蛋白质的双向凝胶电泳205

附录一 实验数据的处理206

附录二 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）211

附录三 常见生化物质电泳后的染色方法212

附录四 常用缓冲液的配制215

参考书目220