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第1章 绪论1

1．1克隆概念1

1．2克隆研究的主要内容2

1．2．1供核细胞的来源和特性2

1．2．2细胞质受体的来源和特性3

1．2．3重构胚核质适应机理3

1．2．4克隆技术支持体系研究4

1．2．5重构胚胎体内和体外培养技术4

1．2．6克隆技术实用化研究4

1．3克隆研究的历史4

1．4克隆研究的现状8

第2章 生物的进化12

2．1地球的形成12

2．2生命的起源13

2．3生物进化13

2．3．1原生动物的出现13

2．3．2双胚层动物14

2．3．3三胚层动物14

2．3．4脊椎动物15

第3章 细胞18

3．1细胞生物学基础18

3．1．1细胞的发现18

3．1．2细胞的概念18

3．1．3细胞的结构与功能20

3．1．4细胞增殖22

3．2细胞培养技术25

3．2．1基本概念25

3．2．2体外培养细胞的基本类型25

3．2．3细胞培养的基本设备26

3．2．4常用培养基的准备31

3．2．5克隆技术中常用的培养基33

3．2．6细胞培养步骤34

3．2．7外源基因导入细胞的方法35

3．3胚胎干细胞36

3．3．1胚胎干细胞的特点36

3．3．2胚胎干细胞的培养和建系38

3．3．3胚胎干细胞的应用39

第4章 动物的繁殖40

4．1繁殖机理40

4．1．1配子的形成40

4．1．2精子的形生41

4．1．3卵泡的发育与排卵42

4．1．4受精作用43

4．1．5胚胎的发育45

4．2动物繁殖生物技术46

4．2．1胚胎移植技术46

4．2．1．1胚胎来源47

4．2．1．2胚胎的采集51

4．2．1．3胚胎的保存51

4．2．1．4受体动物的准备51

4．2．1．5胚胎移植52

4．2．2试管动物技术52

4．2．2．1卵母细胞的来源52

4．2．2．2卵母细胞的体外培养和成熟53

4．2．2．3体外受精53

第5章 动物基因工程55

5．1转基因动物技术55

5．1．1转基因的构建55

5．1．1．1转基因的基本结构55

5．1．1．2转基因鸡表达载体的构建57

5．1．2转基因动物培育方法57

5．1．2．1原核胚的显微注射法57

5．1．2．2单细胞阶段的显微注射法制备转基因鸡58

5．1．2．3胚胎干细胞法61

5．1．2．4反转录病毒载体法61

5．1．2．5体细胞转染和胚胎克隆法62

5．1．2．6原始生殖细胞介导法62

5．1．2．7精子载体法63

5．1．2．8脂质体介导精子作载体导入外源基因法63

5．1．3转基因的检测63

5．1．4基因构件功能的检测63

5．1．4．1体外方法64

5．1．4．2活体组织DNA直接注射法64

5．1．4．3诱导泌乳法64

5．1．5基因表达的检测64

5．1．5．1表达产物的测定64

5．1．5．2报告基因的应用65

5．1．6组织特异性表达系统66

5．1．6．1乳腺表达系统66

5．1．6．2血液表达系统66

5．1．6．3膀胱表达系统67

5．1．6．4禽类输卵管表达系统67

5．1．6．5昆虫体液表达系统68

5．1．6．6精液表达系统69

5．1．7转基因动物作为食物引起的社会反响69

5．1．8各国的对策69

5．1．9关于转基因动物安全性70

5．1．10转基因动物的管理70

5．2基因打靶技术71

5．2．1同源重组72

5．2．2载体的设计和构建75

5．2．2．1插入型载体75

5．2．2．2置换型载体75

5．2．3靶细胞来源77

5．2．4打靶载体导入细胞技术77

5．2．5基因打靶技术程序78

5．2．6中靶细胞的筛选和富集78

5．2．7基因打靶的类型79

5．2．8基因打靶的应用80

5．2．8．1基因敲除的应用80

5．2．8．2基因功能的修饰81

5．2．8．3基因表达的调控82

第6章 微生物和分子克隆83

6．1微生物的克隆83

6．1．1微生物概念83

6．1．2微生物的形态和结构84

6．1．2．1原核微生物84

6．1．2．2真核微生物85

6．1．2．3非细胞微生物85

6．1．3微生物的繁殖86

6．1．4微生物的培养87

6．1．4．1常用器具87

6．1．4．2培养基88

6．1．4．3微生物纯培养方法88

6．1．5基因工程菌89

6．2分子克隆技术90

6．2．1 DNA重组分子的制造90

6．2．2重组DNA的克隆91

第7章 动物克隆技术95

7．1哺乳动物克隆技术95

7．1．1克隆实验室主要设备96

7．1．2卵母细胞的来源96

7．1．3核供体细胞的来源97

7．1．4哺乳动物的核移植98

7．2胚胎分割99

7．3胚胎细胞克隆101

7．3．1供核胚的来源和卵裂球的分离101

7．3．2核移植101

7．3．3多代克隆技术101

7．4胚胎干细胞克隆102

7．5胎儿成纤维细胞核移植103

7．6成体细胞克隆104

7．6．1明星“多莉”的克隆104

7．6．1．1技术要点105

7．6．1．2供核细胞来源105

7．6．1．3供核细胞培养106

7．6．1．4胞质供体106

7．6．1．5卵母细胞的去核106

7．6．1．6去核卵母细胞的激活106

7．6．2檀香山技术106

7．6．2．1技术特点107

7．6．2．2供核细胞107

7．6．2．3卵母细胞的采集和去核107

7．6．2．4卵母细胞激活108

7．6．2．5重构胚的移植108

7．6．3转基因克隆技术108

7．6．3．1构建载体109

7．6．3．2体细胞的培养和基因转染109

7．6．3．3转染细胞的鉴定110

7．6．3．4核移植110

7．6．4基因打靶转基因克隆技术110

7．6．4．1目的基因（靶基因）的选择110

7．6．4．2打靶载体的构建111

7．6．4．3基因打靶转基因克隆羊产生过程111

7．6．5异种动物克隆113

第8章 克隆技术的应用117

8．1克隆技术在畜牧业生产上的应用118

8．2转基因动物生产120

8．2．1转基因动物研究存在的问题120

8．2．2克隆技术在转基因动物生产中的优势122

8．3特殊动物基因资源的保护123

8．3．1珍稀动物保护123

8．3．2天然抗布鲁氏病牛的克隆125

8．3．3美国野黄牛（gaur）的克隆125

8．4克隆技术和实验动物126

8．4．1实验动物种类126

8．4．2克隆技术与实验动物128

8．5异种器官移植129

8．5．1概述129

8．5．2可能的风险130

8．5．3排异反应131

8．5．4器官移植的管理133

第9章 克隆技术的是非134

9．1克隆技术存在的问题134

9．1．1克隆动物生产费用134

9．1．2克隆动物成活率134

9．1．3克隆动物个体生理或免疫缺陷135

9．1．4克隆动物的早衰现象135

9．2克隆人的争论137

9．2．1争论的由来137

9．2．2技术问题138

9．3影响克隆成功率的因素139

9．3．1克隆成功率139

9．3．2影响克隆成败的可能因素141

9．4克隆展望141

附录一 有关网站143

附录二 进行克隆研究的主要单位144

参考书目146