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第一篇 基础理论1

第一章 分子遗传学进展1

一、DNA的组成1

二、DNA是双螺旋3

三、双螺旋结构的多种形式5

四、基因的分子结构6

五、DNA分子能变性也能复性6

六、基因的作用7

七、基因的性能7

八、突变的分子基础10

九、DNA重组与疾病13

小结14

第二章 DNA体外重组15

一、DNA体外重组的主要步骤15

二、带有目的基因的DNA片段的获得16

三、DNA片段与载体DNA体外人工重组18

四、DNA重组体转入受体细胞及重组体克隆的筛选20

五、外源基因的表达与表达产物21

第三章 克隆载体的性质及应用26

一、质粒的特性及其作为合适载体的条件26

二、大肠杆菌质粒载体27

三、枯草杆菌克隆载体32

四、噬菌体载体33

五、真核细胞的克隆载体36

第四章 分子克隆工具酶39

一、限制性核酸内切酶及其反应条件39

二、同裂酶（同切口限制内切酶）42

三、DNA连接酶46

四、DNA聚合酶Ⅰ47

五、末端转移酶49

六、逆转录酶50

九、核酸外切酶Ⅶ51

七、核酸酶S151

八、核酸酶Bal3151

第五章 重组克隆的筛选和检测53

一、直接筛选法53

二、间接筛选法55

第六章 克隆基因的表达63

一、克隆基因表达的基本条件63

二、在大肠杆菌中为获得有效表达采取的一些设计和方法65

三、克隆基因表达的检测71

四、大肠杆菌以外的其他宿主72

第七章 DNA重排与转位因子74

一、DNA重排74

二、转位因子76

小结82

一、加减法84

第八章 DNA序列分析84

二、化学降解法85

三、末端终止法87

四、M13克隆单链DNA88

五、DNA序列连续测定法89

六、电子计算机的应用91

第九章 真核基因的克隆及其在真核细胞中的表达93

一、真核细胞基因组的特征93

二、真核细胞基因的获得95

三、真核基因的克隆及筛选100

四、真核基因在真核宿主细胞中的表达103

第十章 基因工程的应用108

一、基因工程在研制生物制剂和制药工业中的应用108

二、基因工程在医学基础研究方面的应用114

三、基因工程在临床上的应用114

一、干扰素及其基因的类型和特性116

第十一章 人的干扰素基因及其遗传工程的研究116

二、干扰素cDNA的克隆和表达117

三、干扰素“合成-天然杂合基因”的克隆和表达118

四、干扰素化学合成基因的克隆和表达119

五、从人的基因组DNA直接分离干扰素基因121

六、干扰素基因的核苷酸序列121

七、克隆基因产生的干扰素的特性122

第十二章 腹泻病原菌的遗传工程124

一、用遗传工程技术进行研究的意义124

二、对粘附素的研究125

三、对肠毒素的研究129

四、对侵袭因子的研究140

第十三章 肝炎病毒的分子生物学143

一、病毒性肝炎的概述143

二、HBV的结构145

三、HBV基因的表达150

四、HBV感染与肝癌的关系154

小结155

第十四章 遗传工程的安全防护157

一、遗传工程与生物公害157

二、对生物公害危险度的评价158

三、生物公害的控制160

第二篇 技术与方法168

第十五章 质粒DNA的提取与纯化168

一、氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心纯化质粒DNA168

二、酸酚法纯化质粒DNA171

三、羟基磷灰石和SephacrylS-1000凝胶柱层析制备质粒DNA172

四、简便快速检测质粒DNA的方法174

第十六章 工具酶的制备175

一、限制性核酸内切酶EcoRI的制备175

二、限制性核酸内切酶BamHI的分离和纯化177

三、T4-DNA连接酶的制备179

第十七章 真核细胞mRNA的制备、鉴定与ds-cDNA的合成183

一、哺乳类细胞poly(A)+RNA的制备183

二、以poly(A)+RNA为模板逆转录合成ds-cDNA185

三、mRNA在兔网织红细胞溶胞物体系中的转译189

第十八章 DNA体外重组技术193

一、粘末端连接法193

二、同聚物接尾连接法194

三、平端连接法195

四、人工接头连接法195

五、转化试验方法196

第十九章 核酸分子杂交技术197

一、菌落原位杂交197

二、Southern吸印法199

第二十章 重组体的筛选和检测202

一、125I-SPA固相放射免疫检测技术202

二、pBR322PstI位点插入失活快速碘化检测法205

三、应用微细胞检测克隆基因的表达206

第二十一章 DNA的限制性内切酶图谱绘制法208

一、一次和多次酶解法制图208

二、部分酶解法制图209

第二十二章 DNA序列分析211

一、双脱氧链终止法211

二、化学降解法219

第二十三章 乙型肝炎病毒快速免疫电镜检查226

附录226

一、常用母液的配制226

二、抗菌素溶液的制备227

三、常用电泳缓冲液的制备227

四、常用凝胶加样缓冲液的制备228

五、常用参考书228

六、名词解释229