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第一章 光学显微镜1

第一节 普通光学显微镜1

一、光学显微镜成像原理1

二、光学显微镜基本结构2

三、光学显微镜技术指标4

四、光学显微镜照明技术7

五、光学显微镜使用与保养8

第二节 倒置显微镜9

第三节 相差显微镜10

一、相差显微镜成像原理10

二、相差显微镜装置12

第四节 荧光显微镜13

一、荧光的产生13

二、荧光显微镜组成14

三、荧光素16

四、荧光显微镜主要用途16

五、荧光显微镜使用的主要注意事项17

第五节 激光扫描共聚焦显微镜18

一、激光扫描共聚焦显微镜工作原理18

二、激光扫描共聚焦显微镜扫描方式19

三、激光扫描共聚焦显微镜技术特点21

四、激光扫描共聚焦显微镜主要用途21

第二章 光镜标本基本制作技术24

第一节 取材及固定24

一、动物致死24

二、取材及注意事项25

三、组织固定26

四、固定液28

第二节 固定后处理及石蜡切片34

一、组织修整34

二、组织洗涤35

三、组织脱水35

四、组织透明37

五、组织浸蜡38

六、石蜡包埋39

七、石蜡切片40

第三节 冰冻切片43

一、冰冻切片原理44

二、冰冻切片过程44

三、冰冻切片注意事项45

第四节 振动切片45

一、振动切片原理46

二、振动切片过程46

三、振动切片注意事项47

第五节 苏木素-伊红染色方法48

一、染料与染色48

二、苏木素-伊红染色基本原理49

三、苏木素-伊红染液配制49

四、脱蜡、水洗、脱水和透明等的作用52

五、染色程序53

六、染色注意事项54

第三章 光镜标本特殊染色技术56

第一节 固有结缔组织特殊染色方法56

一、胶原纤维特殊染色56

二、弹性纤维特殊染色58

三、网状纤维特殊染色60

四、胶原纤维、弹性纤维和网状纤维特殊染色62

五、巨噬细胞与成纤维细胞天青-伊红-瑞氏染色63

六、浆细胞天青A-伊红染色63

七、肥大细胞中性红染色63

第二节 血液和骨髓涂片特殊染色方法64

一、Wright染色64

二、Giemsa染色65

三、Wright-Giemsa混合染色65

第三节 肌组织特殊染色方法66

一、Mallory磷钨酸苏木素染色66

二、心肌闰盘碘酸钠-苏木素块染67

三、Nagar-Olsen染色67

第四节 神经组织特殊染色方法68

一、神经元胞体特殊染色68

二、尼氏体特殊染色71

三、神经纤维特殊染色72

四、神经末梢特殊染色75

五、突触特殊染色76

六、髓鞘特殊染色77

七、溃变神经纤维特殊染色79

八、神经胶质细胞特殊染色80

第五节 内分泌系统特殊染色方法84

一、弥散神经内分泌系统细胞特殊染色84

二、脑垂体细胞特殊染色88

三、胰岛特殊染色90

第六节 肝脏特殊染色方法92

一、贮脂细胞特殊染色92

二、肝巨噬细胞特殊染色93

三、胆小管特殊染色93

第四章 光镜标本组织（细胞）化学技术95

第一节 组织（细胞）化学基本方法95

一、固定95

二、染色显示95

第二节 核酸的组织（细胞）化学方法97

一、Feulgen反应显示DNA97

二、荧光Feulgen反应显示DNA98

三、Schiff试剂块染显示DNA99

四、甲基绿-派洛宁改良法显示核酸99

五、Hoechst 33342荧光显示DNA100

六、吖啶橙荧光显示核酸100

七、吖啶橙荧光区别死活细胞101

第三节 蛋白质组织（细胞）化学方法101

一、氨基显示102

二、羧基显示103

三、碱性蛋白质显示104

四、酪氨酸、色氨酸和精氨酸显示105

五、双硫键和SH基显示107

第四节 脂类组织（细胞）化学方法108

一、标本处理109

二、染色显示109

第五节 碳水化合物组织（细胞）化学方法115

一、固定115

二、染色显示116

第六节 酶组织（细胞）化学方法123

一、酶基本概念和种类123

二、酶的保存123

三、影响酶活性的因素124

四、捕捉反应的种类124

五、对照片使用124

六、注意事项125

七、常用酶组织（细胞）化学方法125

第五章 光镜标本免疫组织（细胞）化学技术142

第一节 免疫组织（细胞）化学基本方法142

一、取材、固定及切片等材料准备142

二、基本方法144

第二节 免疫荧光组织（细胞）化学方法150

一、荧光素150

二、免疫荧光组织（细胞）化学法151

三、注意事项153

第三节 免疫酶组织（细胞）化学方法154

一、标记用酶154

二、标记用酶显色155

三、标本复染、脱水、透明和封片158

四、酶标抗体方法159

五、非标记抗体酶方法160

六、注意事项164

第四节 亲和免疫组织（细胞）化学方法164

一、生物素-（链霉）亲和素免疫组织（细胞）化学法165

二、葡萄球菌A蛋白免疫组织（细胞）化学法169

第五节 双重免疫组织（细胞）化学方法169

一、双重免疫荧光组织（细胞）化学法169

二、双重免疫酶组织（细胞）化学法172

三、连续切片双重免疫酶组织（细胞）化学法178

四、注意事项179

第六章 光镜标本杂交组织（细胞）化学技术181

第一节 杂交组织（细胞）化学基本方法181

一、样本固定181

二、杂交前准备182

三、杂交185

四、杂交后处理186

五、显色187

六、对照组设计和结果判断189

第二节 DNA分子杂交组织（细胞）化学方法189

一、生物素标记DNA探针检测靶DNA190

二、碱性磷酸酶标记寡核苷酸探针检测靶DNA192

三、荧光标记DNA探针检测染色质或染色体194

第三节 RNA分子杂交组织（细胞）化学方法200

一、cRNA探针检测组织中RNA200

二、cDNA探针检测体外培养细胞中RNA205

三、寡核苷酸探针检测组织切片中RNA207

第四节 原位PCR方法210

一、直接法原位PCR210

二、间接法原位PCR212

三、原位反转录PCR214

四、原位免疫PCR216

第五节 双重杂交组织（细胞）化学方法和原位杂交与免疫组化双重染色方法217

一、双重杂交组织（细胞）化学法218

二、原位杂交与免疫组化双重染色法220

第七章 光镜标本显微摄影技术222

第一节 显微摄影术常用装置222

一、显微摄影用显微镜222

二、显微摄影装置223

第二节 感光材料与性能227

一、光学显微摄影的感光材料227

二、数码相机的技术指标229

第三节 曝光时间及滤色片选择230

一、曝光时间确定230

二、滤色片使用231

第四节 显微摄影操作233

一、光学相机显微摄影操作步骤233

二、数码相机显微摄影操作步骤233

三、放大倍数确认234

四、显微摄影的注意事项235

第五节 胶片冲洗及照片扩印236

一、黑白胶片和照片的显、定影液配方236

二、黑白胶片冲洗（显影罐中显影）238

三、黑白照片印相与放大238

第八章 光镜标本显微图像处理与分析技术240

第一节 光镜标本显微图像分析系统240

一、光镜标本显微图像分析系统硬件组成240

二、光镜标本显微图像分析系统软件组成242

第二节 生物光镜标本显微图像处理244

一、图像预处理245

二、图像分割248

三、生物光镜标本显微图像特点253

第三节 生物显微图像分析255

一、二维几何参数测量255

二、体视学参数测量257

三、光度学参数测量265

第四节 生物显微图像分析质量控制268

一、图像分析的误差因素268

二、图像分析误差的计算270

三、图像分析的误差控制271

参考文献272

附录1 生物光镜标本技术中常用缓冲液配制273

附录2 生物光镜标本技术中常用参考杂志282

附录3 生物光镜标本技术中常用参考网站284