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第1章　离心机发展与离心技术概述1

1.1 国外实验室离心机的发展概况1

1.2 中国实验室离心机的发展6

1.3　离心分离方法与应用8

1.3.1　差速离心法9

1.3.2　密度梯度离心法9

1.3.3　分析离心11

1.3.4　区带离心12

1.3.5　沉淀离心法13

1.3.6　其他离心方法13

参考文献14

第2章　离心机与转子16

2.1　离心机的分类16

2.1.1　低速离心机16

2.1.2　高速离心机17

2.1.3　超速离心机17

2.2　离心转子18

2.2.1　转子的材料18

2.2.2　转子的分类20

2.3　离心管及其附件27

2.3.1　离心管的材料27

2.3.2　离心管的密封方法29

2.3.3　离心管的适配器29

2.4　离心机与转子的安全性30

2.4.1　离心转子的安全设计31

2.4.2　离心机的使用安全33

参考文献38

第3章　差速离心40

3.1　差速离心的基本原理41

3.1.1　颗粒离心沉降理论42

3.1.2　离心时间的估算与转子参数44

3.2　差速离心法48

3.2.1　差速离心48

3.2.2　差速离心中的基本计算48

3.2.3　生物样品s、n、t的校正50

3.2.4　差速离心中沉降物质的分布52

3.2.5 回收沉淀的差速离心52

3.2.6　回收上清液的差速离心53

3.2.7　全周期差速离心54

3.3　差速离心的应用及注意事项54

3.3.1　植物亚细胞器与病毒颗粒的分离54

3.3.2　差速离心注意事项55

3.3.3　转速n与离心加速度G的估算56

3.3.4　RCF选择换算57

参考文献57

第4章　梯度介质及梯度的制备和密度测定58

4.1　梯度介质58

4.1.1　常用梯度材料60

4.1.2　梯度介质的特性比较71

4.2　密度梯度的制备79

4.2.1　配制密度梯度溶液79

4.2.2　阶梯梯度（不连续梯度）的制备80

4.2.3　连续梯度的制备81

4.3　加样方法86

4.3.1　对样品的要求86

4.3.2　加样量87

4.4　梯度回收方法89

4.4.1　直接回收区带89

4.4.2　定位区带收取90

4.4.3　梯度区带的连续收取法91

4.5　梯度溶液的密度测定92

4.5.1　密度球标记法92

4.5.2　计数密度计直接测定法92

4.5.3　流动检测系统92

4.5.4　折射率法93

参考文献93

第5章　速率区带离心法95

5.1　基本原理95

5.2　速率区带离心的梯度96

5.2.1　等动力梯度96

5.2.2　等体积梯度（isovolume gradient）97

5.2.3　复合梯度99

5.3　离心速度和时间的计算方法100

5.3.1　w2t计算法100

5.3.2　k′系数估算法100

5.3.3 沉降估算辅助（SEA）图［sedimentation estimation aid(SEA)charts］101

5.3.4 sw2t图102

5.3.5 McEwen法估算离心条件104

5.4 速率区带离心在实际应用中应考虑的事项110

5.4.1 梯度的密度范围110

5.4.2　区带的稳定性110

5.4.3　梯度的体积和温度111

5.4.4　区带的分辨率111

5.4.5　速率区带离心成功的准则112

参考文献112

第6章　等密度离心法113

6.1　等密度梯度离心原理114

6.2　等密度梯度离心的基本条件选择114

6.2.1　等密度梯度离心的选择114

6.2.2　等密度梯度离心115

6.2.3　平衡等密度梯度离心中颗粒到达平衡所需时间122

6.2.4　预形成密度梯度124

6.3　等密度梯度离心的特点和应用126

6.3.1　等密度梯度离心126

6.3.2　等密度梯度离心的应用126

参考文献127

第7章　细胞分离128

7.1　分离细胞的基本离心方法128

7.1.1　根据密度进行分离128

7.1.2　根据沉降速度进行分离129

7.1.3　分离细胞的梯度介质和梯度类型132

7.2　影响细胞分离的因素133

7.2.1　细胞间的相互作用133

7.2.2　介质对细胞体积和密度的影响134

7.2.3　样品装载量134

7.2.4　壁效应135

7.2.5　潮流（小滴沉降）135

7.2.6　离心力136

7.2.7　分离温度136

7.2.8　在分离过程中细胞所处状态136

7.2.9　悬浮液体积136

7.2.10　转子操作137

7.3　设计细胞分离方法的指导路线137

7.4　分离细胞的实验方案138

7.4.1　分离血液细胞138

7.4.2　分离肝脏细胞146

7.4.3　分离心肌细胞153

7.4.4　等密度离心在分离其他哺乳细胞中的应用155

7.5　细胞的速度沉降分离155

7.5.1　速度沉降法分离细胞主要影响因素156

7.5.2　按细胞沉降速度分离的基本方法156

7.5.3　细胞的离心淘洗分离157

参考文献162

第8章　细胞器和细胞膜的分离163

8.1　组织与细胞的匀浆方法163

8.1.1　机械匀浆方法164

8.1.2　匀浆介质165

8.1.3　匀浆策略167

8.1.4　评价匀浆效果168

8.2　组织匀浆的离心和各部分的组成169

8.2.1　亚细胞颗粒的物理特性169

8.2.2　组织匀浆离心和各部分的组成169

8.2.3　梯度纯化172

8.2.4　分离亚细胞器的梯度介质173

8.3　评价分离纯化效果175

8.4　若干亚细胞器分离纯化方法177

8.4.1　分离细胞核177

8.4.2　分离线粒体188

8.4.3　分离质膜195

8.4.4　分离过氧化物酶体198

8.4.5　分离溶酶体203

参考文献206

第9章　分离生物大分子208

9.1　用等密度离心法分离生物大分子208

9.1.1　生物大分子在不同梯度介质中的浮力密度208

9.1.2　转子选择209

9.1.3　选择梯度介质210

9.1.4　梯度斜率210

9.1.5　到达平衡的时间211

9.1.6　等密度区带离心的分辨率212

9.2　速率区带离心法213

9.2.1　转子选择213

9.2.2　选择梯度介质和溶剂214

9.2.3　选择梯度形状215

9.3　若干生物大分子的分离和纯化方法216

9.3.1　分离核酸216

9.3.2　分离细胞核其他大分子237

9.3.3　分离脂蛋白238

参考文献248

第10章　在区带转子中的分离250

10.1　概述250

10.1.1　命名和分类251

10.1.2 半径-体积关系253

10.1.3　样品浓度和装载容量253

10.2　旋转密封（动态加载）区带转子255

10.2.1　设计255

10.2.2　使用要点256

10.2.3　装载转子256

10.2.4　离心实验运转259

10.2.5　卸载和回收样品260

10.2.6　样品体积260

10.2.7　商品类型261

10.3　重定向梯度区带转子261

10.3.1　设计261

10.3.2　操作策略262

10.3.3　梯度重定向262

10.3.4　在重定向转子中的梯度设计265

10.3.5　商品重定向梯度区带转子265

10.3.6　A型、B型和重定向区带转子的应用267

10.4　连续流离心技术269

10.4.1　设计269

10.4.2　操作策略270

10.5 区带离心过程中易出现的问题275

10.5.1　交叉漏液275

10.5.2　气泡276

10.5.3　温度控制276

10.5.4　转子体与盖间的配合277

10.6　区带转子在实际中的应用277

10.6.1　细胞分离277

10.6.2　分离大分子（分离核糖体及亚单位）279

10.6.3　生产疫苗281

参考文献283

第11章　分析超速离心技术及其应用284

11.1　分析超速离心机及其转子284

11.2　光学系统287

11.3　分析超速离心的一般原理287

11.4　分析离心基本理论289

11.4.1　沉降速度289

11.4.2　沉降平衡290

11.5　沉降系数的测定291

11.5.1　沉降系数测定实验方法选择292

11.5.2　沉降图形的评价292

11.5.3　沉降系数测定实例295

11.5.4　影响沉降速度因素分析296

11.5.5　证明样品均质性的一般原理298

11.5.6　沉降系数（s）值的校正298

11.6　分子量测定299

11.6.1　常规沉降平衡法299

11.6.2　弯月面耗尽沉降平衡法299

11.6.3　超短柱沉降平衡法300

11.6.4　Archibald法300

11.6.5　用经验公式估算核酸分子的分子量300

11.6.6　常规沉降平衡法的实验操作300

11.7　扩散系数的测定302

11.7.1　Schlieren光电扫描扩散系数测定实例302

11.7.2　吸收光学系统光电扫描扩散系数测定实例303

11.7.3　扩散系数测定中的误差分析303

11.8　偏微比容的测定304

11.9　分子形状与大小305

11.9.1　f′/f0（摩尔摩擦系数比）305

11.9.2　未水合圆球形分子在溶液中的形状和大小305

11.9.3　水合非球形蛋白分子的形状和大小306

参考文献307

第12章 与离心机有关的其他分离技术概述308

12.1　自抽连续离心机308

12.1.1　原理308

12.1.2　应用311

12.2　沉降场流分级技术315

12.2.1　场流分级概述315

12.2.2　沉降场流分级320

参考文献325