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第1章 基本原理介绍1

1.引言1

2.培养细胞的生物学1

2.1培养的来源和特征1

2.2分化3

3.培养材料的选择4

3.1器官培养或细胞培养4

3.2组织来源5

3.3传代培养6

3.4培养液的选择8

3.5气相9

3.6基质10

4.培养的准备10

4.1基质10

4.2培养液11

4.3细胞12

参考文献15

第2章 培养哺乳类细胞使用的化学成分明确培养液及无血清培养液17

1.引言17

2.血清在细胞培养中的作用17

2.1血清成分的作用17

2.2细胞培养中使用血清的优点和缺点22

3.无血清培养液设计策略和培养液的应用24

3.1一般程序24

3.2培养液选择前的考虑25

3.3无血清培养液要求的成分和因素:作用和性质26

3.4最佳培养液的测定分析34

3.5细胞培养的低血清和无血清培养液35

3.6激素和生长因子的选择36

3.7大规模培养生产细胞时无血清和化学明确培养液的设计42

4.无血清培养液的制备和操作44

4.1一般原则和准备过程44

4.2细胞从有血清到无血清和化学明确培养液的适应45

5.生物基质涂抹培养表面的程序48

参考文献50

第三章 动物细胞大规模培养技术54

1.引言54

2.一般方法和培养参数55

2.1细胞的定量测定55

2.2设备和试剂57

2.3实施考虑58

2.4细胞生长的动力学59

2.5培养液和营养物质60

2.6pH值62

2.7氧气64

2.8大规模培养系统的类型69

2.9限制大规模培养因素的概述71

3.单层细胞培养72

3.1引言72

3.2细胞贴壁74

3.3大规模细胞培养75

4.悬浮细胞培养91

4.1细胞对悬浮培养的适应91

4.2静止的悬浮培养94

4.3小规模的悬浮培养95

4.4影响大规模悬浮培养的因素95

4.5搅拌生物反应器98

4.6连续流动的培养系统99

4.7气动发酵器102

5.固定培养103

5.1固定培养系统104

5.2包被培养系统106

5.3有孔微载体107

参考文献109

第4章 培养细胞的保存与特性鉴定111

1.引言111

2.细胞库的建立112

3.细胞的冷冻与定量复苏114

3.1仪器115

3.2准备二作及冷冻程序117

3.3冷冻细胞的定量复苏和再建118

4.细胞系特征122

4.1细胞种的鉴定122

4.2微生物污染的检测132

4.3同种细胞间交叉污染的测定144

4.4细胞系组织来源的鉴定159

4.5免疫产物的定性与定量测定167

5.细胞来源及特征数据的计算机化172

6.致谢173

参考文献173

第5章 细胞离心淘洗分离活细胞技术176

1.引言176

2.细胞分离方法176

3.细胞淘洗器178

3.1淘洗器转头178

3.2淘洗室178

3.3蠕动泵及附件180

3.4离心淘洗系统182

4.技术操作183

5.数据收集及处理187

5.1不同种细胞群的淘洗(各部分细胞纯度的测定)187

5.2已建立细胞系的细胞群体的淘洗187

6.发展前景190

7.致谢193

参考文献193

第6章 流式细胞术194

1.引言194

2.操作原理196

2.1流体动力学的聚集196

2.2激发197

2.3聚焦198

2.4光束几何学199

2.5光学过滤201

2.6光散射204

3.数据输出与分析211

3.1数据显示211

3.2数据分析213

4.质量控制217

4.1检查217

4.2重合校正217

4.3脉冲形状分析218

4.4时间220

5.细胞分选222

5.1静电分选222

5.2分选效率224

6.样品的制备228

6.1不同组织细胞悬液的制备228

7.分析种类范例232

7.1非染色细胞的光散射232

7.2染色方法233

7.3染色方法的应用238

7.4荧光素抗体的应用技术240

7.5讨论242

参考文献244

第7章 器官培养247

1.引言247

2.器官组织培养技术的回顾247

2.1凝固的血浆底物248

2.2琼脂基质248

2.3漂浮法249

2.4格栅培养法249

2.5交替暴露培养液和气相的培养法249

3.表玻璃培养技术250

3.1血浆凝固体与“球王筏”技术的结合256

4.Maximow单载片培养技术257

5.琼脂胶培养技术259

5.1体外运用悬浮技术研究小鼠胚胎块的发育266

6.用于畸胎学研究的胚胎培养269

7.格栅培养方法271

8.组织的器官培养:实例280

8.1神经细胞280

8.2新生大鼠肝脏282

8.3兔主动脉283

8.4人小梁网系统285

8.5人胃肠粘膜286

9.人成体组织的长期培养287

10.器官培养物光镜样品的制备290

10.1组织切片的制备290

10.2染色方法291

11.放射自显影术294

11.1类固醇放射自显影298

12.结果的定量300

13.器官培养的优缺点301

参考文献302

第8章 细胞毒和活性检测305

1.引言305

2.背景知识306

3.特异的培养技术307

3.1培养方法308

3.2药物作用时间与药物浓度312

3.3恢复期314

4.终点显示315

4.1细胞毒性、存活力和存活315

4.2细胞毒性与存活力315

4.3存活(生殖完整性)323

5.检测法的比较324

6.操作步骤325

6.1药物及药物溶液325

6.2药物温育326

6.3存活与繁殖能力检测327

6.4细胞毒性检测334

7.结果的解释342

7.1细胞数和细胞毒指数间的关系342

7.2剂量-反应曲线343

8.细胞毒和活力检测的疑难点345

8.1大的标准误346

8.2检测间的变异346

8.3高于对照水平的刺激346

9.自动化作业与未来的发展348

参考文献348

第9章 原位杂交352

1.引言352

2.杂交技术352

2.1载玻片的处理352

2.2固定353

2.3原位杂交355

2.4洗脱程序356

2.5信号检测356

3.原位杂交的应用356

4.探针的选择357

5.标记物的选择358

6.灵敏度359

7.阴性对照359

8.原位杂交的具体步骤360

9.致谢363

参考文献363

附录365

A1常规试剂365

A2专门项目供应367