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第一篇 实验技术与原理3

第一章 生物大分子样品制备3

第一节 材料的选择与处理4

第二节 细胞破碎5

第三节 抽提6

第四节 浓缩与纯化8

第五节 样品保存10

第六节 制备方案设计与评价11

第二章 离心技术13

第一节 基本原理13

第二节 离心机的主要构造和类型14

第三节 差速离心法17

第四节 密度梯度离心法17

第五节 分析超离心19

第三章 层析技术20

第一节 基本原理20

第二节 吸附层析21

第三节 疏水层析28

第四节 离子交换层析29

第五节 凝胶过滤层析35

第六节 亲和层析39

第四章 电泳技术44

第一节 基本原理44

第二节 醋酸纤维素薄膜电泳45

第三节 聚丙烯凝酰胺胶电泳46

第四节 印迹法（转移电泳）48

第五节 毛细管电泳49

第六节 琼脂糖凝胶电泳51

第五章 分光光度法52

第一节 基本原理52

第二节 紫外－可见光光度法53

第三节 荧光光谱分析法56

第六章 分子克隆技术58

第一节 基本原理58

第二节 基因片段制备61

第三节 质粒DNA制备62

第四节 DNA重组64

第七章 克隆化基因的表达与检测技术66

第一节 基本原理66

第二节 外源基因在原核系统中的表达69

第三节 外源基因在真核系统中的表达71

第四节 蛋白质Western blot检测73

第八章 核酸分子杂交75

第一节 基本原理75

第二节 核酸探针的制备和标记77

第三节 Southern印记80

第四节 Northern印记81

第九章 聚合酶链反应（PCR）技术82

第一节 基本原理82

第二节 原位PCR83

第三节 逆转录PCR84

第四节 实时定量PCR85

第五节 甲基化PCR87

第二篇 基础实验操作91

第十章 蛋白质91

实验一 从牛奶中分离酪蛋白91

实验二 蛋白质的定量测定92

实验三 血清蛋白质的电泳分离96

实验四 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子量107

实验五 离子交换层析分离混合氨基酸114

第十一章 核 酸116

实验六 人外周血基因组DNA提取116

实验七 肝脏RNA提取（苯酚法）120

实验八 核酸的定量测定（定磷法、紫外吸收法）122

实验九 琼脂糖凝胶电泳分离DNA126

实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离RNA131

实验十一 人基因组DNA多态性分析133

第十二章 酶136

实验十二 胰蛋白酶的分离纯化136

实验十三 酸性磷酸酶Km和Vmax值测定138

实验十四 唾液淀粉酶的最适pH测定146

实验十五 乳酸脱氢酶同工酶分析148

第十三章 物质代谢151

实验十六 激素对血糖的调节作用151

实验十七 转氨基作用（纸层析法）156

实验十八 肌糖原酵解作用163

实验十九 血清谷丙转氨酶（SGPT）活性测定（King氏法）166

实验二十 脂肪酸的β－氧化作用169

第十四章 分子生物学实验173

实验二十一 质粒DNA的提取173

实验二十二 DNA酶切及片段回收179

实验二十三 PCR体外扩增目的基因188

实验二十四 反转录PCR（RT-PCR）196

实验二十五 大肠杆菌感受态细胞制备199

实验二十六 重组质粒连接、转化与筛选202

实验二十七 Southern杂交205

实验二十八 Northern杂交209

实验二十九 外源基因的诱导表达212

实验三十 蛋白质印迹法检测蛋白214

实验三十一 乙型肝炎的PCR诊断218

第三篇 设计性实验223

第十五章 设计性实验概述223

第一节 背景介绍223

第二节 基本类型和要素224

第三节 组织实施225

第十六章 实验选题和设计227

第一节 实验选题227

第二节 实验设计228

第十七章 数据处理与论文撰写231

第一节 结果观察与记录231

第二节 数据处理与分析232

第三节 实验报告的撰写232

第四节 科研论文的撰写235

第十八章 实施案例239

第一节 设计性实验技术模块239

第二节 设计性实验案例240

附录242

参考文献249