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第1章 化学生物学实验基本知识1

1.1 实验室规则及须知1

1.2 实验室安全及防护知识1

1.2.1 防生物源性危害的基本措施2

1.2.2 放射性和紫外线辐射的危害和防护2

1.2.3 特殊化学生物学试剂的安全使用与储存2

1.2.4 化学生物学实验室废弃物的处理3

第2章 化学生物学实验基本操作6

2.1 常用仪器的洗涤与清洁6

2.1.1 玻璃器皿的清洗6

2.1.2 其他材质器皿的清洗6

2.1.3 铬酸洗液的配制方法和使用注意事项7

2.1.4 其他常用的洗液7

2.2 常用消毒灭菌方法7

2.2.1 物理消毒灭菌方法7

2.2.2 化学消毒灭菌方法8

2.3 离心技术9

2.3.1 离心技术的原理9

2.3.2 离心机的类型和转头的分类11

2.3.3 常用离心方法12

2.4 常用层析技术13

2.4.1 凝胶层析13

2.4.2 离子交换层析14

2.4.3 亲和层析15

2.4.4 疏水层析15

2.5 电泳技术16

2.5.1 基本原理16

2.5.2 琼脂糖凝胶电泳16

2.5.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳16

2.5.4 等电聚焦电泳17

2.5.5 二维电泳18

2.5.6 毛细管电泳18

2.5.7 凝胶成像技术19

2.6 PCR技术19

2.6.1 PCR技术简介19

2.6.2 PCR技术的基本原理和过程19

2.6.3 PCR反应的五个元素21

2.7 DNA测序技术22

2.8 细胞培养技术23

2.8.1 体外培养细胞的分类23

2.8.2 培养细胞的生长和增殖过程24

2.8.3 原代培养25

2.8.4 传代培养25

2.8.5 细胞的冻存与复苏26

2.9 化学生物学样品制备、纯化、浓缩和干燥26

2.9.1 材料的选取和前处理26

2.9.2 细胞的破碎27

2.9.3 蛋白质的提取和纯化27

2.9.4 核酸的提取和纯化28

2.9.5 样品的浓缩和干燥29

第3章 生化分离分析实验技术31

实验1 疏水作用色谱分离纯化α-淀粉酶31

实验2 亲和层析树脂的制备及溶菌酶的提取纯化36

实验3 香菇多糖的提取、纯化及总糖含量测定40

实验4 青霉素酰化酶米氏常数和反应活性的测定44

实验5 静电自组装构筑HRP多层膜电极检测酚类物质研究47

实验6 表面等离子光谱生物传感器研究抗原与抗体的相互作用50

实验7 FRET法及荧光猝灭法测定蛋白酶的活性54

第4章 生物材料制备实验技术60

实验8 生物矿物和生物矿化——碳酸钙多形的控制与制备60

实验9 无定形碳酸钙的制备和转化62

实验10 硫酸链霉素肺靶向明胶微球的制备及含量测定64

实验11 聚乙烯亚胺-DNA复合物粒径的测定67

实验12 聚乙烯亚胺－阿霉素共聚物的合成70

实验13 复凝聚法制备阿霉素微囊及细胞毒性评价72

实验14 盐酸左氧氟沙星不同晶形的制备及其表征76

第5章 化学中基因工程实验技术80

实验15 质粒DNA的提取与纯化80

实验16 大肠杆菌感受态细胞制备与质粒DNA的转化84

实验17 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段87

实验18 PCR基因扩增获取毛囊DNA及其分离90

实验19 植物组织中基因组DNA的提取与扩增91

实验20 PCR-RFLP法检测单核苷酸多态性95

实验21 基于连接反应的滚环扩增技术检测单核苷酸多态性100

实验22 枯草杆菌脂肪酶A的基因克隆104

第6章 化学中蛋白质工程实验技术112

实验23 酰化酶催化4－硝基咪唑的Markovnikov加成反应112

实验24 2′-脱氧尿苷衍生物的酶促合成的选择性调控114

实验25 酶催化Michael加成反应117

实验26 Novozym 435催化的1－位芳基取代的末端炔丙醇动力学拆分反应120

实验27 金属卟啉模拟的生物氧化过程122

实验28 泛素蛋白的操控式分子动力学模拟125

实验29 纤连蛋白在羟磷灰石上吸附－脱附过程的分子模拟136

第7章 化学中细胞工程实验技术144

实验30 动物细胞的培养144

实验31 MTT法测定聚乙烯亚胺的细胞毒性148

实验32 抗肿瘤药物5－氟尿嘧啶对肿瘤细胞的抑制及细胞形态观察150

实验33 ATP生物荧光药敏检测技术检测5－氟尿嘧啶对卵巢癌细胞的药敏实验153

实验34 抗肿瘤药物5－氟尿嘧啶对肿瘤细胞迁移的影响156

实验35 聚乙烯亚胺-DNA复合物的制备和体外细胞转染实验158

实验36 聚乙烯亚胺携带基因在细胞中的荧光染色实验160

实验37 聚乙烯亚胺作为基因载体材料携带TRAIL基因对细胞凋亡的影响163

实验38 聚乙烯亚胺－阿霉素聚合物的细胞摄取实验166

实验39 硫酸氢氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞株GES－1增殖影响168

实验40 喹诺酮类药物盐酸左氧氟沙星的抑菌实验170

实验41 聚乙烯亚胺-阿霉素皮下注射体内滞留实验172

第8章 附录175

8.1 常用仪器的使用说明175

8.1.1 移液枪175

8.1.2 气相色谱仪177

8.1.3 液相色谱仪178

8.1.4 紫外－可见分光光度计179

8.1.5 红外光谱仪181

8.1.6 荧光分光光度计182

8.1.7 PCR仪183

8.1.8 表面等离子共振生物传感实验仪184

8.1.9 蛋白质分离纯化系统187

8.1.10 CHI电化学分析仪188

8.1.11 高速冷冻离心机189

8.1.12 CO2培养箱191

8.1.13 倒置相差显微镜192

8.1.14 酶标仪193

8.1.15 活体荧光成像系统194

8.2 常用缓冲溶液的配制195

8.3 常用特殊化学生物学试剂的配制197

8.3.1 细胞培养液的配制197

8.3.2 MTT溶液的配制方法198

8.3.3 HE染色液的配制198

8.4 Linux操作系统的基本操作199

8.5 生物信息数据库200